| Tartalmi leírás: |
Kísérleteim során a Dnmt3b DNS metiltranszferázt próbáltam túltermeltetni transzgénikus egérmodellben. A túltermelést szabályozott módon, tetraciklin regulációval, illetve a megfelelő Dnmt3b funkcionális mRNS szabályozott időpontban történő mikroinjektálásával próbáltam elérni. A gén megjelenésének időpontját úgy választottam meg, hogy az lehetőség szerint megzavarja a korai embrionális korban történő metilációs mintázat kialakulását. A kísérletekben a Dnmt3b nem tartalmazta az un. CPE motívumot, így lehetősége van a fehérjének közvetlenül hatni a korai embrionális korban is. A létrehozott transzgénikus egér szabályozott módon, de nagyon alacsony mértékben expresszálta a transzgént. Így nem volt kimutatható szerepe a DNS metilációra sem globális szinten, sem a H19 és Snrpn gének esetében. A mikroinjektált RNS esetében sem sikerült a kis szatellit szekvenciák metiláltságában különbséget találni, azonban a H19 gén megfelelő régiójában enyhe hipermetiláció alakult ki a felnőtt állatok májában. | In my experiments I tried to overexpress the human Dnmt3b DNA methyltransferase in transgenic mouse models. Overexpression was regulated by tetracyclin or by the perfect microinjection timing of functional Dnmt3b mRNA. The temporary appearance of gene expression was formed due to disturb the developing methylation pattern in the early embryonic stages. The nucleic acid constructs created do not contain the special CPE motifs so the recombinant protein can directly act in the early embryonic stages. The transgenic mouse line generated expresses the transgene in a regulated way but expression was extremely weak. We could not show any DNA hypermethylation not at global genomic level nor in the cases of H19 and Snrpn genes. The specially microinjected RNA did not changed the methylation status of centromeric minor satellite sequences, but slight hypermethylation occurred in H19 DMR region of the liver DNA.
|
