Ugrás a tartalomhoz

 

A Drosophila 26S proteasoma molekuláris jellemzése = Molecular characterization of the Drosophila 26S proteasome

  • Metaadatok
Tartalom: http://real.mtak.hu/1321/
Archívum: MTA Könyvtár
Gyűjtemény: Status = Published

Type = Monograph
Cím:
A Drosophila 26S proteasoma molekuláris jellemzése = Molecular characterization of the Drosophila 26S proteasome
Létrehozó:
Udvardy, Andor
Kiss, Petra Veronika
Sümegi, Máté Gergely
Szabó, Áron
Kiadó:
OTKA
Dátum:
2008
Téma:
QH3015 Molecular biology / molekuláris biológia
Tartalmi leírás:
Módszert dolgoztunk ki Drosophila melanogaster multiubiquitinált fehérjéinak tisztítására és tömegspektrometriás azonosítására. A Drosophila 26S proteaszóma multiubiquitin receptor alegységének háromszorosan tag-gelt változatát állítottuk elő, ez a módosított fehérje megtartotta multiubiquitinált fehérje kötő képességét. Ezt a fehérjét használva affinitás kromatográfiás rendszerben sikerült szelektíven megkötni a multiubiquitinált fehérjéket és megszabadulni a bakteriális és Drosophila eredetű szennyező fehérjéktől. A módszer lehetőséget teremt a Drosophila multiubiquitinált proteómjának feltérképezésére, e proteom fejlődés- és szövetspecifikus változásainak jellemzésére. A Drosophila 26S proteaszóma multiubiquitin receptor alegységének extraproteaszómális szerepét vizsgálva megállapítottuk, hogy a receptor alegység C-terminális felének ektópikus expressziója transzgénikus állatokban lárvális letalitást okoz, és a receptor fehérje ubiquitinálódik. Ez az ubiquitináció azonban nem degradációs szignál, mert a transzgén terméke egy hosszú élettartamú, stabil fehérje. Az ubiquitinációnak feltehetően szerepe van a receptor fehérje extraproteaszómális funkciójában, és ennek a funkciónak megzavarása letális. Molekulárisan jellemeztük a 26S proteaszóma egyik ATPase alegységének szerkezetét és szerepét az alegységre mutáns Drosophila törzsben. | We have established a method for the purification and mass spectrometric identification of multiubiquitinated proteins in Drosophila melanogaster. Triple-tagged version of the ubiquitin receptor subunit of the 26S proteasome has been constructed, this modified version of the subunit retained its multiubiquitin-binding property. This modified subunit was used as an affinity matrix for the purification of multiubiquitinated proteins. Consecutive affinity purifications on tag-specific columns allowed the elimination of contaminating bacterial and Drosophila proteins. This method opens the way for the establishment of Drosophila multiubiquitinated proteome, and the analysis of the developmental and tissue specific variations of this proteome. Analyzing the extraproteasomal function of the ubiquitin receptor subunit of the Drosophila 26S proteasome we have shown that the ectopic expression of the C-terminal half of the subunit in transgenic Drosophila results in larval lethality, and the transgenic protein becomes ubiquitinated. This ubiquitination, however, is not a degradation signal, because the transgenic protein is a stable, long-lived protein. The ubiquitination of this subunit is probably connected with its extraproteasomal function, and the disturbance of this function is lethal. Using a mutant Drosophila stock we presented a detailed molecular characterization of an ATPase subunit of the 26S proteasome.
Típus:
Monograph
PeerReviewed
Formátum:
application/pdf
Azonosító:
Udvardy, Andor and Kiss, Petra Veronika and Sümegi, Máté Gergely and Szabó, Áron (2008) A Drosophila 26S proteasoma molekuláris jellemzése = Molecular characterization of the Drosophila 26S proteasome. Project Report. OTKA.
Kapcsolat: